許秋這做法,似乎有點不對啊!
常規的抗體提取與純化辦法,是使用ProteinG柱粗提血清總IgG。
這個過程中,抗體亞型分選和聚合體去除其實隻能省略。
畢竟這一操作太過繁瑣,而且也不是這麼簡單就能完成分選與去除的。
然而,許秋的方法卻截然不同。
段善繼甚至看得有些迷糊了。
“你這……做的是什麼?”
良久,段善繼終於是按捺不住好奇心,咽了下口水後問道。
許秋手中的操作繼續。
口裡也同步給出了解說:“段教授平日裡做的,應該是利用ProteinG柱粗提血清總IgG吧?”
段善繼手指顫抖了一下。
聽許秋這語氣,似乎是要給自己上課了?!
這不對吧?
而一旁的邱偉、張驍等人也是瞪大了眼睛。
等等,不是……這發生了什麼!
段教授竟然看不懂許秋的操作目的?
這怎麼可能!
眾多研究所內的科研人員也趕緊看向操作區。
然而,他們也被許秋那令人眼花繚亂的動作給整暈了,同樣是一頭的霧水。
事實上,段善繼能認出許秋的操作細節,但,卻不明白操作目的。
因而此時倒也按下了內心的些許不悅,道:“的確,ProteinG柱粗提血清總IgG是常規手法,你難道有什麼創新不成?”
許秋沒有回答這個問題。
而是轉而提起ProteinG柱粗提法的缺陷,道:“通過傳統粗提取提純出來的總IgG中含有大量非特異性抗體,比如抗食物蛋白抗體,這會直接導致後續交叉反應實驗假陽性,導致實驗者的嚴重誤判。
“此外,未能夠去除的IgG聚合體可能通過空間位阻掩蓋真實結合位點。
“再者就是,這種情況下,我們沒法驗證抗體功能活性。即便是部分變性IgG喪失結合能力,我們也沒法發覺。”
簡單來說,就是三點。
一個是不夠純,會導致實驗結果不精準。
另一個,是太多影響結合的因素,即便是嗜沫凝聚杆菌與血清結合了,也可能會被遮擋住,難以察覺。
而最後一點,就是實驗中出了什麼問題導致IgG失效甚至是死亡,也沒法判斷到底是“不結合”,還是“抗體失效”。
這些因素導致的結果是,即便是一路做下來了,最終的ELISA信號也可能來自非目標抗體,誤判交叉反應存在!
這會嚴重感染實驗結果。
而聽完這些,段善繼瞳孔微微一縮。
這些問題都真實存在。
但卻幾乎無解。
許秋能給出這些看法,其實已經說明他的水平相當不低了。
然而……從理論層麵找出問題誰都能做到,關鍵是,根本沒法預防啊!
難不成許秋有辦法?
想到這,段善繼下意識地看向了術區。
此時通過許秋列舉的缺點,對許秋的操作步驟進行分析,段善繼突然看懂了。
他手指開始顫抖。
嘴皮子也有些哆嗦。
好像……真有用?
不過,邱偉、張驍等人還是一臉的茫然。
而此刻許秋也給出了解釋,道:“我對這個方案進行了一定程度的改良。
“首先是預處理。
“我采取了MelonGel預處理,具體步驟是優先去除白蛋白、轉鐵蛋白,這兩占血清蛋白的百分之九十,通過操作,可以提高IgG純度。
“此外,進行GM1親和層析,這一方法可以僅保留能結合GM1的IgG亞群,而它占總體的比例甚至小於百分之五,聚合體掩蓋真實結合位點的概率會大大降低。
“最後就是SEC去除聚合體,而它能夠確保單體IgG占比大於百分之九十五。”
隨後,許秋一一講解了操作的細節。
包括各種關鍵步驟如何處理。
很快,所有人臉上的表情就被驚駭所覆蓋了。
其中段善繼是最為震撼了。
按照他的預估,用許秋的改良方案進行處理後,特異性能提升三四倍。
而且,經過許秋層析後的單體IgG能夠有效避免空間位阻,真實反映表位結合能力!
段善繼突然有點手癢了。
他忍不住在旁邊也做了一個常規方法的抗體提取與純化。
想要通過對比,看看許秋的方法優勢究竟有多大。
不過,說實話,段善繼還是很有自信的。
儘管都是常規方法,但段善繼手法嫻熟,極為專業。
對細節的把控幾乎可以說做到了極點。
僅僅是普通的粗提操作,就做得賞心悅目,讓邱偉等人都感覺眼前一亮。
很快,段善繼也結束了抗體提取與純化。
隨後他迫不及待地將自己的結果與許秋的結果進行對比。
但,令他吃驚的一幕出現了——通過數據對比:自己采取的常規方法,IgG與GM1結合OD值僅僅隻有1.2。
而許秋處理過的,OD值卻飆升至3.5!
所謂OD值,其實就是光密度,它經常被用於表示被檢測物吸收掉的光密度,通常可以代表測定物質的含量。
而且,被檢測物濃度越高,吸光度的值就會越高。
放在這個病例上麵。
相同的血清,一致的嗜沫凝聚杆菌菌種,結合OD值越大,越能標誌著IgG與GM1結合,則效果越好。
按理說,兩者的結合OD值應該不會相差太大。
然而事實上卻是,許秋的改良方案,OD值幾乎是段善繼的一點五倍了!
但最令人詫異的還不是這個。
而是……病人的競爭抑製率。
段善繼處理過後的樣本,競爭抑製率差不多在百分之四十左右。
而許秋,卻達到了百分之九十二……
這意味著,粗提IgG中存在大量乾擾抗體,導致競爭抑製率大幅度降低,嚴重乾擾了實驗結果!
“怎麼會差距這麼大!”
段善繼有點難以理解了。
他知道許秋的改良方案算是不錯了。
但眼下,直觀的數據卻給了他一個冷冰冰的答案——他與許秋差得太遠!
這一刻,段善繼突然有點沒法接受了。
到底……誰才是科研大佬,誰才是神經免疫學專家來著?
“還行,還行。你繼續。”
段善繼默默地蓋上了對比數據,嘴角抽搐地說了一句。
許秋倒也沒追問。
他並不在乎對比結果。
相比之下,專注於自己內心已經定下的實驗方案,才是最重要的。
畢竟如今最有可能在三天之內破開彭月嬌怪病真相的,就是自己了。